Каталог :: Медицина

Диплом: Биохимические показатели крови человека при сальмонеллезной интоксикации

Реферат.
Дипломная работа на тему: «Биохимические показатели крови человека при
сальмонеллезной интоксикации» содержит 46 страниц печатного текста,
таблиц, 8 рисунков, 59 использованных источников литературы, из них 10
иностранных.
Перечень ключевых слов: сальмонеллез, перекисное окисление липидов,
циркулирующие иммунные комплексы, каталаза, молекулы средней массы,
сывороточный альбумин, эндогенная интоксикация.
Объект исследования: сыворотка крови практически здоровых людей и больных
сальмонеллезом г. Пензы.
Практическое применение: в здравоохранении.
                               Список сокращений.                               
ПОЛ – перекисное окисление липидов;
ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы;
ЧСА – человеческий сывороточный альбумин;
МДА – малоновый диальдегид;
ПЭГ – полиэтиленгликоль;
АОС – антиокислительная способность;
АТ – антитело;
АГ – антиген;
ИК – иммунный комплекс;
ЛПС – липополисахаридный комплекс;
МСМ – молекулы средней массы;
ТБК – тиобарбитуровая кислота;
ЭКА – эффективная концентрация альбумина;
ОКА – общая концентрация альбумина;
ТХУ – трихлоруксусная кислота;
ЦНС – центральная нервная система;
ц-АМФ – циклический аденозинмонофосфат;
АФК – активные формы кислорода;
LOOH, HOOH – гидроперекиси;
СОД – супероксиддисмутаза.
                                   Содержание.                                   
     

Введение..........................

1. Обзор литературы .....................

1.1. Биохимическая характеристика интоксикации при сальмонеллезной инфекции................

1.2. Молекулярные механизмы развития эндогенной

интоксикации при сальмонеллезе.............

1.3. Показатели уровня эндогенной интоксикации

организма при сальмонеллезе.............

2. Материалы и методы исследования...........

2.1. Материалы исследования...............

2.2. Методы исследования................

3. Результаты и обсуждение................

3.1. Определение показателей уровня интоксикации в

сыворотке крови практически здоровых людей....

3.2. Определение показателей уровня интоксикации в

сыворотке крови больных сальмонеллезом........

Список использованных источников.............

Выводы..........................

Приложения........................

5-6

7-19

7-11

11-14

14-19

20-25

20

20-25

26-34

26-27

28-34

35-40

41

42-46

Введение Успехи в борьбе с инфекционными заболеваниями в нашей стране общепризнанны. Вместе с тем в инфектологии еще остаются проблемы, имеющие серьезное социально-экономическое значение для всех стран мира. К их числу относятся острые кишечные инфекционные заболевания [1]. Сальмонеллез – группа острых кишечных инфекционных болезней, вызываемых бактериями рода Salmonella, характеризующихся значительным полиморфизмом клинического течения, частым наличием интоксикации, лихорадки, признаков поражения желудочно-кишечного тракта [2]. Крупные достижения отечественных и зарубежных исследователей, установивших патогенетическое значение нарушения биологической регуляции при острых кишечных инфекциях, дали новый импульс в изучении патогенеза сальмонеллеза [3]. Иммунная система представляет собой сложную многокомпонентную систему из быстроделящихся и покоящихся клеток. Она является высокочувствительной к воздействию токсинов бактерий. Это приводит к нарушению иммунорегуляторных процессов. Наиболее информативными являются показатели состояний прооксидантно- антиоксидантного равновесия, которое при усилении действия на организм токсинов смещается в сторону активизации ПОЛ, уровня холестерина, ЦИК, Ит, МСМ. ПОЛ – это фундаментальный универсальный молекулярный механизм, лежащий в основе устойчивости и адаптационных возможностей организма. В норме ПОЛ обеспечивает условие для жизненно важных функций клетки, в случае же интоксикации становится пусковым механизмом патобиохимических изменений в организме человека. Целью моей дипломной работы является изучение биохимических показателей эндотоксикоза в динамике патологического процесса. В задачи исследования входило: 1. Определение содержания МДА, уровня холестерина, ЦИК, Ит, МСМ и активности каталазы в группе контроля, которую составили практически здоровые люди. 2. Определение содержания МДА, уровня холестерина, ЦИК, Ит, МСМ и активности каталазы у больных сальмонеллезом. 3. Исследование изменения изучаемых показателей у больных в зависимости от степени тяжести заболевания. 1. Обзор литературы 1.1. Биохимическая характеристика интоксикации при сальмонеллезной инфекции Сальмонеллезы принадлежат к числу инфекционных заболеваний, весьма широко распространенных на всех континентах мира. Возбудителем сальмонеллезов являются микроорганизмы, принадлежащие к роду Salmonella, семейства кишечных Enterobacteriaceae. Сальмонеллы – это мелкие бактерии вытянутой формы с закругленными концами длиной от 1 до 3 и диаметром 0,5-0,8 нм [4]. Сальмонеллез встречается чаще у жителей городов, чем сел, что связывается с лучшей регистрацией заболеваемости, наличием множественных детских учреждений, широким употреблением пищевых полуфабрикатов. Заболевание отмечается круглый год, но максимальное число регистрируется в теплое время года, что объясняется благоприятными условиями размножения сальмонелл в пищевых продуктах и реализации инфекции [5]. Таблица 1.1.1. Статистические данные больных сальмонеллезом г. Пензы.
Год

Количество больных

г. Пензы

На 100 тыс. населения, %

Кол-во больных Пензенской

области

На 100 тыс. населения, %
199618734,936223,1
199714026,131620,3
199823043,044828,8
В возникновении сальмонеллеза ведущую роль играют живые бактерии, гибель которых в организме больного сопровождается развитием эндотоксинемии. Принято выделять два вида токсичных продуктов жизнедеятельности микробов-экзотоксии и эндотоксии. К экзотоксинам отнесены токсичные продукты жизнедеятельности бактерий, активно (при жизни) секретируемые в окружающую среду, а к эндотоксинам – те ядовитые для макроорганизма продукты жизнедеятельности, которые освобождаются только при лизисе микробной клетки [6]. Кроме токсина палочка имеет ряд антигенов клеточной стенки. О-антиген расположен на поверхности микробной клетки и представляет собой фосфолипидно- полисахаридный комплекс, включающий 60 % полисахарида, 20-30 % липида и 3-4,5 % гексозамина. Н-антиген определяется жгутиками. Поверхностные антигены клеточной стенки провоцируют типоспецифический антительный ответ, а глубинные – видоспецифический [6,7]. При сальмонеллезе развитие и тяжесть симптомов обусловлены интоксикацией и обезвоживанием. По мнению А.Ф. Билибина интоксикация – явление сложное, сводящееся к изменению нервнорефлекторной деятельности и гуморальной регуляции с обменными сдвигами. К.В. Бунин в основу синдрома интоксикации ставит воздействие токсина на : 1) падение артериального давления, снижение сократительной способности миокарда; 2) гормональную регуляцию водно-солевого обмена с изменениями биосинтеза гормонов в коре надпочечников с угнетением процесса их метаболизма; 3) функцию почек (снижение клубочковой фильтрации, повышение канальцевой реабсорбции воды, снижение концентрации очищения мочевины) [8]. Сальмонеллезная интоксикация возникает как результат патологии первичного ответа на инфекционный агент вследствие значительных потерь воды и электролитов с рвотой и жидким стулом. По мере увеличения дефицита воды и электролитов на первый план выступают симптомы обезвоживания и поражения ЦНС. Если процесс прогрессирует, обезвоживание нарастает, появляются признаки недостаточности кровообращения, которые при интоксикации имеют клинику шока. Частая рвота и понос – первые признаки интоксикации [9]. Обязательным условием развития заболевания являются наличие большого количества возбудителей и их токсинов, массовое проникновение антигенов в кровь. Наибольшей токсичностью отличается липид А, вызывающий следующие основные реакции: активацию лейкоцитов и макрофагов, стимуляцию выброса эндогенного пирогена, антогониста глюкокортикоидов, интерферона, интерлейкинов, подавление тканевого дыхания, активацию системы комплемента, тромбоцитов, факторов свертывания крови другие [10,11], [рис. 1.1.1]. Главной причиной развития шока при сальмонеллезе считается не повреждающее действие самих микробов или их токсинов, а своеобразный ответ организма на них. Под токсико-инфекционным шоком следует понимать экстремальное состояние организма, наступающее в результате действия токсичных субстанций возбудителей, патогенных иммунных комплексов на органы и ткани организма, сопровождающееся острым нарушением метаболизма в них [12]. Схематическое изображение липополисахаридов стенок микробов.

Рис. 1.1.1. С.А. Степанов с помощью аспирационной биопсии обнаружил в тонкой кишке больных сальмонеллезом изменение эпителия, острое воспаление слизистой оболочки, нарушение микроциркуляции и сосудистой проницаемости. К.Х. Ходжаев в эксперименте на крысах показал, что сальмонеллезная инфекция вызывает нарушение процесов тканевого дыхания и фосфорилирования. Состояние поджелудочной железы изучено Белянской Т.А. В острый период болезни отмечено снижение ферментативной активности панкреатического сока – уровень трипсина был снижен в 71 % случаев, липазы в 55 %, амилазы – в 66 %. Таким образом эндотоксин вызывает активацию синтеза, преимущественно протеолитических ферментов, задержку экструзии секретируемых проэнзимов, что приводит к секреции и поступлению ферментов в лимфатическое и кровеносное русло [13,14]. При сальмонеллезе развивается обезвоживание, обусловленное потерей внеклеточной жидкости, а при тяжелом течении заболевания и части клеточной. Дегидратация в большинстве случаев имеет изотонический характер, сочетаясь с развитием сгущения крови, дефицитом электролитов, метаболическим ацидозом в капиллярной и венозной крови [15], [рис. 1.1.2]. 1.2. Молекулярные механизмы развития эндогенной интоксикации при сальмонеллезе Явления интоксикации вызывают заболевания, сопровождающиеся повышенным распадом тканей, усиленными процессами катаболизма, недостаточностью функции печени и почек, снижением процессов микроциркуляции [16]. В ответ на действие первичного патогена, которым являются эндотоксины, сальмонелл, в организме развиваются типовые каскадные реакции, что лежит в основе современной концепции СЭИ. На Международном симпозиуме в Санкт-Петербурге (1994 г) было дано определение этого синдрома как клинического синдрома с проявлением симптомов интоксикации при патологических состояниях неоднородных по этиологии и обуславливающих накопление в тканях и биологических жидкостях организма продуктов патологического обмена веществ, метаболитов, деструкции клеточных и тканевых структур, разрушения белковых молекул [17,18]. Шано В.П. с соавторами подчеркивает, что токсическое влияние липополисахаридной субстанции эндотоксина проявляется комплексом нарушений, обусловленных повреждением как циркулирующих клеток в кровотоке, так и эндотелиоцитов, эозинофилов, нейтрофилов, макрофагов, следствием чего является выброс в кровоток ряда биологически активных веществ – цитокинов, интерлейкинов. Главной точкой приложения эндотоксина являются эндотелиальные клетки, активация их приводит к высвобождению простациклина, выделению эластазы, токсических метаболитов кислорода, факторов активации тромбоцитов и комплемента с высвобождением терминального комплекса комплемента, брадикинина с последующим формированием синдрома повышенной проницаемости капилляров. Это приводит к тому, что в очаг воспаления начинают входить компоненты крови, прежде всего фибриноген и тромбоциты. Фибрин способствует агрегации тромбоцитов, полимеризации фибрина и – возникновению тромбов. Следствием тромбоза являются нарушения микроциркуляции с последующей гипоксией, что приводит к дальнейшим повреждениям клеток в очаге воспаления. Метаболическим результатом этого является изменение аэробного метаболизма клеток на анаэробный, повышенное продуцирование лактата и протонов, снижение показателей рН [19]. Среди тканевых (клеточных) медиаторов воспаления важное место занимают простагландины. Исходными продуктами для биосинтеза простагландинов являются ненасыщенные жирные кислоты: линолевая, арахидоновая, пентаноевая. Наибольшее значение имеет в организме арахидоновая кислота, которая содержится в фосфолипидах клеточных мембран. Простагландины вызывают сильное диуретическое и натрийуретическое действие, оказывают разнообразное действие на желудочно-кишечный тракт. Они могут стимулировать и тормозить сокращение и секреторную активность тонкой кишки, тормозят секрецию соляной кислоты слизистой оболочки желудка. Простагландины вызывают секрецию воды и электролитов в просвет кишки, вызывая диарею, повышают концентрацию ц-АМФ в слизистой оболочке тонкой кишки, влияют на прочность и упругость эритроцитарной мембраны [20, 21, 22, 49]. 1.3. Показатели уровня эндогенной интоксикации организма при сальмонеллезе Анализируя данные литературы за последние десятилетия, можно сказать, что основными показателями интоксикации при сальмонеллезе являются ПОЛ, уровня холестерина, ЦИК, ИТ, МСМ и активность каталазы. При развитии интоксикации на фоне сальмонеллеза происходит активный хемотаксис нейтрофиллов в очаг воспаления, где они поглощая и переваривая чужеродный агент, изменяют свою метаболическую активность, характеризующуюся усилением поглощения кислорода, повышенной утилизацией глюкозы и гиперпродукцией АФК ( ) [23, 24]. Перекисное окисление является универсальным механизмом взаимодействия кислорода со многими органическими субстратами, в том числе с липидами. Внедрение кислорода в молекулы окисленного субстрата приводит к образованию реакционно-способных промежуточных продуктов – свободных радикалов, гидроперекисей, которые в дальнейшем вызывают повреждение других классов соединений – белков, нуклеиновых кислот, углеводов (рис. 1.3.1). Метаболизм супероксидного радикала в норме и при патологии (Владимиров Ю.Я., 1998) Рис. 1.3.1. Накопленные к настоящему времени данные литературы позволяют сделать вывод о том, что свободнорадикальное окисление липидов при сальмонеллезной инфекции играет определенную патогенетическую роль [25, 50]. Установлено, что при развитии ПОЛ в биомембранах понижается содержание легкоокисляемых полиненасыщенных жирных кислот и изменяются физико-химические свойства: микровязкость, текучесть, мембранный потенциал, полярность внутренних областей мембран. Таким образом, изменяются транспортные свойства мембраны и активность ферментов [26]. Регуляция свободнорадикального окисления обеспечивается в клетке системой антиоксидантной защиты. Так, накапливающаяся в процессе ПОЛ перекись водорода обезвреживается с помощью каталазы, присутствующей во всех тканях организма. Каталаза (КФ 1.11.1.6.) представляет собой гемсодержащий фермент с молекулярной массой около 250000 Д, локализованный в пероксисомах клеток [27]. Митохондриальная каталаза участвует в оксидазном пути окисления, сопровождающемся запасанием энергии в виде АТФ. Блокирование транспорта электронов в дыхательной цепи приводит к стимуляции пероксисомального окисления. При потологиях, связанных с нарушением энергетических процессов, каталаза пероксисом может выходить из них и участвовать в окислении на мембранах эндоплазматического ретикулума [28, 53]. В работе Л.Б. Оконенко с соавторами о состоянии антиоксидантной системы судили по активности СОД, глутатионпероксидазы и каталазы, анализ данных выявил дефицит антиоксидантов [29, 30]. При инфекционном токсикозе в мембранах эритроцитов резко снижается содержание общих фосфолипидов, но увеличивается количество НЭЖК и лизофосфотидилхолина, что косвенно указывает на повышение активности фосфолилаз, которые избирательно разрушают липиды мембран. Холестерин подвергается как активному, так и пассивному обмену в мембранах эритроцитов [29]. Фермент лецитинхолестеролацил трансфераза превращает эфиры холестерина в свободный холестерин и тем самым регулирует уровень свободного холестерина в плазме, что способствует проникновению его в мембраны. Следовательно, инактивация этого фермента в результате гипоксии при эндотоксикозе ведет к повышению уровня эфиров холестерина в мембранах эритроцитов [31,32]. Наряду с уровнем МДА, активности каталазы и уровня холестерина для диагностики заболевания и его прогноза имеют значение и другие неспецифические показатели – ЦИК, Ит, МСМ. Синтезирующиеся при формировании иммунитета специфические антитела обладают способностью взаимодействовать с антигенами возбудителей и тем самым вызывать нейтрализацию патогенных микробов и их токсинов. Эта реакция сопровождается образованием иммунных комплексов антиген – антитело [33, 34, 54, 55]. При патологических состояниях образование ИК выходит из под контроля, в результате чего развивается та или иная болезнь ИК [рис. 1.3.2.]. Патогенетические механизмы болезней иммунных комплексов (Сура В.В., 1987)

Рис. 1.3.2. В результате развития эндотоксемии при сальмонеллезе организм длительное время контактирует с избытком АГ как экзогенного (компоненты микробных клеток), так и эндогенного (компоненты разрушенных клеток самого организма) происхождения. Вместе с тем наблюдается угнетение системы комплемента, ответственного за лизис микробных клеток. В этих условиях значительного избытка АГ и недостаточности выработки АТ может привести к образованию ИК, которые способны откладываться в определенных тканях и вызывать острые воспалительные реакции. При значительных отложениях наблюдаются функциональные и морфологические повреждения органов и тканей [35]. Связываясь с клеточной мембраной ЦИК вызывают выделение в окружающую среду протеолитических ферментов и основных пептидов. Эти вещества повреждают протеогликановые компоненты тканей, действуют на базальную мембрану и вызывают некроз эндотелиальных клеток [36]. ЦИК наряду с продуктами ПОЛ вызывают нарушение проницаемости мембран, вплоть до их разрыва, что в конечном итоге может привести к гибели клетки. В результате появляются различные вещества пентидной природы. Из них наибольший интерес представляют молекулы средней массы. Являясь олигопептидами с молекулярной массой 300-5000 Дальтон, они расцениваются как универсальный критерий эндогенной интоксикации и влияют на ее уровень и прогноз [37, 38]. МСМ образуются в организме под воздействием повреждающих эндогенных или экзогенных факторов различного генеза, являются промежуточными продуктами протеолиза. [39, 57]. Пристальное внимание исследователей к МСМ объясняется высокой биологической активностью их отдельных фракций, которые ингибируют гликолиз, глюконеогенез, пентозный цикл, синтез гемоглабина, нуклеиновых кислот, мембранный транспорт, дагоцитов, эритропоэз, микроциркуляцию, обладают иммунодепрессивным, цитотоксическим, нейро- и психотропным свойствами. Сейчас, квалификационная оценка степени тяжести состояния больных при сальмонеллезе немыслима без определения МСМ [40]. Установлено, что значительная часть циркулирующих в крови СМ не только растворена в плазме крови, но и связана с альбумином. Человеческий сывороточный альбулин (ЧСА) – важнейший транспортный белок, осуществляющий перенос эндогенных метаболитов и ксенобиотиков в плазме крови, межклеточной жидкости, в лимфе. Универсальность транспортной функции ЧСА обеспечивается его уникальной способностью связывать лиганды различной химической природы. Интенсивная лигандная нагрузка молекул альбулина приводит к изменению их структуры и связывающей способности. Такие модификационные формы ЧСА обнаруживаются при патологии [41]. О величине токсического действия вредных веществ можно судить по ЭКА, которая снижается после того, как токсические вещества займут центры связывания в молекуле альбулина, что приводит к снижению детоксикационных свойств организма. Изучение свойств альбулина является важным с точки зрения как диагностики, так и лечения [42]. 2. Материалы и методы исследований 2.1. Материал исследований Уровень интоксикации оценивался по изменениям в крови больных эффективной и общей концентраций сывороточного альбулина, малонового диальдегида, как одного из продуктов ПОЛ, уровня холестерина, ЦИК, МСМ и активности каталазы. Для всех исследований бралась сыворотка крови. Исследовано 30 больных сальмонеллезом в возрасте от 17 до 46 лет. Для контроля набиралась группа 51 человека разного пола в возрасте от 20 до 46 лет. Кровь бралась из локтевой вены, преимущественно натощак в количестве не менее 5 мл. Центрифугируем 1500 об/мин 10 минут. Для выполнения анализов сыворотки необходимо использовать сразу или заморозить и хранить при t=-20 С. 2.2. Методы исследований 2.2.1. Определение МДА с тиобарбитуровой кислотой (Конюхова В.С., 1989) Об изменении интенсивности ПОЛ судим по изменению уровня вторичного продукта ПОЛ – малонового диальдегида. Метод основан на том, что при высокой температуре в кислой среде МДА реагирует с 2-ТБК, образуя окрашенный розовый триметиновый комплекс с максимумом поглощения при 535 им. Ход работы: К 0,2 мл сыворотки крови добавить 0,2 мл дистиллированной воды, 1 мл 0,6 % ТБК в ледяной уксусной кислоте. Кипятить 30 минут, охладить и добавить 1 мл 5№ КОН и 2 мл изопропанола. Центрифугируют при 6000 об/мин 20 минут. Колориметрируют при 535 нм и 580 нм против контроля, содержащего вместо плазмы воду. Расчет: (мкМоль/л), где Е – оптическое поглащение изопропилового экстракта; 106 – коэффициент пересчета оптической плотности. Пример расчета: больной Максимов С., 19 лет концентрация МДА = (мкМоль/л). 2.2.2. Определение активности каталазы (Королюк М.А., 1988) Метод основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс. Ход определения: Реакция запускается добавлением 0,1 мл сыворотки крови к 2 мл 0,03 % раствора перекиси водорода. В холостую пробу вместо сыворотки вносят 0,1 мл дистиллированной воды. Реакцию останавливают через 10 минут добавлением 1 мл 4% молибдата аммония. Интенсивность окраски измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм против контрольной пробы, в которой вместо перекиси водорода вносят 2 мл воды. Расчет: (мкат/л), где Е – активность каталазы в мкат/л; А – оптическая плотность холостой и опытной проб; V – объем вносимой пробы, 0,1 мл; t – время инкубации, 600 сек; К – коэффициент миллимолярной экстинкции перекиси водорода, равный . За единицу активности каталазы принимают то количество фермента, которое участвует в превращении 1 мкат перекиси водорода за 1 секунду при заданных условиях. Расчет активности каталазы ведут на 1 л сыворотки крови. Пример расчета: больной Крайнов Т.В., 31 год. (мкат/л) 2.2.3. Определение общего холестерина в сыворотке крови ферментативным методом «Фотокол» (Творогова М.Г., 1995) Определение основано на сопряженных реакциях, которые катализирует холестеринэстераза, холесериноксидаза и пероксидаза: Эфиры холестерина холестерин + Ж.К.; Холестерин + О2 холестинон + Н2О2; Н2О2 + хромогены Н2О + окрашенный продукт. Концентрация образующегося в ходе реакции окрашенного продукта пропорциональна концентрации холестерина в пробе. Ход определения: Рабочий реагент обязательно вносить в пробирки после проб, содержащих холестерин. Пробирки встряхнуть и инкубировать при t = 37o С. Через 10 минут после начала инкубации пробирки повторно встряхнуть и инкубировать 20 минут при t = 37oС. Окрашенные пробы фотометрировать при 500 нм в кювете с длиной оптического пути 5 мм или 10 мм относительно холостой пробы. Окраска стабильна в течении двух часов при комнатной температуре. Концентрацию холестерина в исследуемых пробах рассчитать по формуле: ммоль/л, где ЕОП и ЕК – оптические плотности исследуемой пробы и пробы с калибратором. Норма: 3,62 – 5,2 ммоль/л. 2.2.4. Определение циркулирующих иммунных комплексов в крови методом ПЭГ-теста (Гриневич Ю.А., 1988) Метод основан на селективной преципитации комплексов АТ-АГ в 3,75 % ПЭГ (полиэтиленгликоля) с последующим определением плотности преципитата. Реактивы: 1) 0,1 м боратный буфер (3,410 г борной кислоты, 4,275 г буры растворить в 1 л дистиллированной воды) 2) 10 г полиэтиленгликоль – 6000 ед. растворить в 240 мл буфера. Ход определения: К 0,3 мл сыворотки крови добавить 0,6 мл реактива №1, перемешать и перенести по 0,3 мл в 2 пробирки. В I добавить 2,7 мл раствора №1 (контроль). Во II добавить 2,7 мл раствора №2 (опыт). Перемешать, инкубировать в течение 60 минут при комнатной температуре. На спектрофотометре (КФК-3) определяют оптическую плотность в кюветах при 450 нм. Расчет: Высчитывают разность показателей оптической плотности, результат умножают на 1000 и получают количество ИК в 100 мл сыворотки. Ответ выражают в единицах оптической плотности. - количество ЦИК в 100 мл сыворотки. Норма: 54,24 + 2,03 усл. ед. Пример расчета: больной Максимов С.И., 19 лет. Количество ЦИК в 100 мл сыворотки: усл. ед. 2.2.5. Определение уровня МСМ в крови (Габриэлен Н.И., 1984) Метод основан на осаждении белков из исследуемой жидкости 10 % раствором ТХУ с последующем центрифугированием и определением абсорбции света супернатантом в 10 раз разведенным дистиллированной водой. Ход работы: Сыворотку крови обрабатывают 10 % раствором ТХУ. В качестве контроля лучше использовать сам раствор ТХУ в 30 раз разведенный дистиллированной водой. Оптическая плотность его против воды составляет 0,123±0,012 усл. ед. на волне 254 нм при 23-25С. Центрифигируем 3000 об/мин в течение 30 минут. К 0,5 мл надосадочной жидкости +4,5 мл дистиллированной воды. Измерение проводим на спектрофотометре в УФ свете при 280 нм для определения ароматических аминокислот и при длине волны 254 нм для определения нуклеотидов. Уровень МСМ выражают в единицах, количественно равных показателям экстинции. 2.2.6. Определение показателей «эффективная концентрация альбумина» и «общая концентрация альбумина» в сыворотке крови человека флуоресцентным методом (Миллер Ю.И., 1994). Принцип метода: Метод основан на специфическом взаимодействии флуоресцентных органических соединений с альбумином в сыворотке крови. В зависимости от условий этого взаимодействия интенсивность флуоресценции красителя из альбумина отражает различные свойства белка. Индекс ЭКА/ОКА не зависит от числа молекул альбумина в пробе и характеризует физико-химические свойства молекулы альбумина. Состав набора: Реактив I (4 ампулы по 5 мл). Предназначен для приготовления раствора используемого при разбавлении сыворотки крови. Он содержит антикоагулянт ЭДТА. Реактив II (4 ампулы по 0,7 мл). Основным компонентом является специальное флуоресцирующее соединение, интенсивность флуоресценции которого в сыворотке крови пропорциональна концентрации сывороточного альбумина. Реактив III (4 ампулы по 0,7 мл). Взаимодействие реактивов №2 и №3 с сывороткой позволяет определить ОКА. Определение показателя ЭКА: К 2,0 мл надосадочной жидкости добавить 0,025 мл реактива 2. Перемешать. Измерить интенсивность флуоресценции при длине волны возбуждения 420 нм и длине волны испускания 515 нм. Определение показателя ОКА: В ту же пробу добавить 0,025 мл реактива 3. Перемешать. Измерить интенсивность флуоресценции. Нормальные величины показателя ЭКА лежат в интервале нормальных значений ОКА от 40 г/л – 55 г/л. Подготовка образцов крови к измерениям: Буферный раствор: Содержимое ампулы с реактивом 1 перенести в 100 мл дистиллированной воды. Перемешать. 0,025 мл сыворотки крови добавить в пробирку, содержащую 5 мл раствора для разбавления крови. Для анализа берут жидкость 2,0 мл полученного образца. Используют специализированный анализатор АКЛ-0,1. 3. Результаты исследования и их обсуждение 3.1. Определение показателей уровня интоксикации в сыворотке крови практически здоровых людей Нами было произведено исследование биохимических показателей – МДА, активность каталазы, уровень холестерина, ЦИК, МСМ, Ит в сыворотке крови 51 донора в возрасте от 20 до 46 лет. Сыворотка крови доноров была получена на ОСПК (областная станция переливания крови) г. Пензы. Полученные результаты биохимических анализов были подвергнуты статистической обработке, согласно методам и приемам статистического анализа. По данным комитета экспертов Международной федерации клинической химии по референтным величинам рекомендуется верхняя и нижняя границы нормы на уровне М±1,96σ, состояние предболезни М±2σ, состояние острой формы М±3σ. Об уровне процессов ПОЛ судили по концентрации вторичного продукта МДА. Содержание количества МДА составляет 3,61±0,07 мкМоль/л. Это значение близко к данным, найденным в литературе (табл. 3.1.1). У 48 человек значение содержания МДА входит в границы М±1,96σ. У 3 человек (5 %) содержание МДА соответствует значению М±2σ, что соответствует состоянию предболезни. Активность каталазы у практически здоровых людей составила 16,7±0,15 мкат/л (табл. 3.1.1). При исследовании активности каталазы в группе доноров отклонений за пределы М±1,96σ мы не наблюдали. Уровень холестерина, определяемый нами у практически здоровых людей составил 4,45±0,68 ммоль/л (табл. 3.3.1.), показатели уложились в границу референтной величины М±1,96σ. Содержание ЦИК, определяемое нами в сыворотке крови практически здоровых людей составило 52,62±3,52 усл. ед. (табл. 3.1.1). 94 % людей по показателям ЦИК входит в границы нормы, а 6% находятся в состоянии предболезни. Уровень МСМ у обследованных доноров в среднем составил 0,280±0,01 усл. ед. Это значение близко к данным, найденным в литературе (табл. 3.1.1). При исследовании МСМ отклонений за пределы М±1,96σ мы не наблюдаем. У практически здоровых людей определена детоксикационная нагрузка сывороточного альбумина, т.е. определение общей и эффективной концентрации альбумина. Токсичность по альбумину составляет 0,13±0,01 усл. ед. (табл. 3.1.1). Все значения токсичности по альбумину вошли в границы М±1,96σ. Полученные нами данные не имели существенных отличий от значений этих показателей, имеющихся в литературе в сравнении с приложением 2. Таблица 3.1.1. Содержание биохимических показателей в сыворотке крови практически здоровых людей

Группа

обследованных

n

МДА

мкМоль/л

Активность

каталазы

мкат/л

ЦИК

усл. ед.

МСМ

усл. ед.

Ит

усл. ед.

Холестерин

ммоль/л

Практически

здоровые

513,61±0,0716,7±0,1552,62±3,520,28±0,010,13±0,014,45±0,68
3.2. Определение показателей уровня интоксикации в сыворотке крови больных сальмонеллезом Сыворотка крови больных исследовалась на базе центра госсанэпиднадзора г. Пензы. Исследования биохимических показателей велись в острую фазу заболевания и в период ранней реконвалесценции. Обследовано нами 30 больных сальмонеллезом в возрасте от 17 до 46 лет, с целью установления показателей, характеризующих эндотоксикоз: перекисное окисление липидов, уровень холестерина, Ит по сывороточному альбумину, циркулирующих иммунных комплексов, молекул средней массы и активности каталазы. Причем биохимические показатели крови в разгар заболевания отличались от показателей в период ранней реконвалесценции. Таблица 3.2.1. Биохимические показатели сыворотки крови у больных сальмонеллезом

Группа

обследованных

МДА

мкМоль/л

Активность

каталазы

мКат/л

Ит

усл. ед.

ЦИК

усл. ед.

МСМ

усл. ед.

Холестерин ммоль/л

Контроль, n=51 (практически

здоровые)

3,61±0,07

16,7±0,15

0,13±0,01

52,62±3,520.280±0,014,45±0,68
Больные (острый период) n=30

7,19±0,2

13,09±0.16

0,29±0,01

100,63±4,040,550±0,026,54±0,07

Больные (ранняя

реконвалесценция) n=30

3,87±0,15

15,84±0,19

0,15±0,01

68,9±2,80,310±0,024,65±0,7

р≤0,001

р≤0,01

р≤0,001

р≤0,001р≤0,05р≤0,01
Так, в ходе исследования выявлено достоверное увеличение количества МДА в сыворотке крови больных сальмонеллезом на 99 % по отношению к контролю, т.е. возрастает в 2 раза. Данные наших исследований подтверждаются сведениями Л.Б. Оконенко, Л.Д. Мартыненко и другими. По данным этих авторов концентрация МДА при сальмонеллезе возрастает в 2-2,5 раза. Как видно из таблицы (табл. 3.2.1), у больных наблюдается интенсификация ПОЛ. Под воздействием сальмонеллезного токсина происходит нарушение липидных бислоев клеточных и субклеточных мембран. Накопление в крови первичных и вторичных продуктов ПОЛ идет не в силу количественных изменений в содержании фосфолипидов плазмы крови, а вследствие интенсификации их свободнорадикального окисления. Результатом инициации ПОЛ становится образование критических концентраций продуктов ПОЛ, которые токсичны для организма. Известно, что повышение ПОЛ может приводить к нарушению проницаемости мембран с последующей инактивацией мембранно-ассоциированных ферментных систем, выходом лизосомальных гидролаз в цитозоль, что вызывает повреждение ДНК т другие существенные изменения в структуре и функциональном состоянии клетки [29, 43, 51, 52]. Установлено, что при ряде инфекционных заболеваний развивается антиоксидантная недостаточность. Одновременно снижается актиность ферментов антиоксидантной защиты, в частности каталазы [44]. По нашим наблюдениям, активность каталазы снизилась на 22 % в острый период заболевания по отношению к контролю. В период ранней реконвалесценции показатель активности каталазы приближается к контролю (табл. 3.2.1). Л.Б. Оконенко, Л.И. Волкова в своих работах отмечает угнетение каталазной активности. В острый период заболевания происходит резкое сокращение антиоксидантной обеспеченности организма [26, 29]. А.С. Волков указывает на то, что в процессе эндотоксикации метаболические расстройства приводят к гиперлипидемии. Это подтверждается данными наших наблюдений. Так, уровень холестерина в сыворотке крови больных сальмонеллезом в среднем составил 6,54±0,07 ммоль/л, что на 46,9% больше контроля (табл. 3.2.1). Таким образом, гиперхолестеринемия характеризует патологию обмена липидов и липопротеидов [32,45]. В период ранней реконвалесуценции уровень холестерина приближается к контролю [рис. 3.2.1].

Процентное соотношение показателей липидного обмена при эндотоксикозе, вызванном сальмонеллезной инфекцией Рис. 3.2.1. Анализируя результаты проведенных исследований, мы установили, что содержание ЦИК в плазме крови больных сальмонеллезом на 91 % больше, чем в контроле [рис. 3.2.2]. Полученные данные согласуются с выводами исследования И.А. Ильинского, Т.В. Лукинской и других. Повышенное содержание ЦИК говорит о снижении антителообразования в присутствии избытка антигенов. В подобной ситуации ЦИК индуцирует острое иммунное воспаление, сопровождающееся повреждением эндотелия сосудов и почечных клубочков, активацией кининовой системы, что ведет к более серьезным метаболическим нарушениям [46, 47, 48]. Как правило, повышение уровня ЦИК обнаруживается уже в начальный период болезни, на этом же уровне содержание их остается и в острую фазу. Только в стадии реконвалесценции наблюдается понижение показателей [табл. 3.2.1]. Процентное соотношение показателей эндотоксикоза (ЦИК, МСМ) в сыворотке больных относительно контроля

Рис. 3.2.2. При воспалении воздействие протеиназ на протеогликановые комплексы тканей приводит к образованию пула токсических веществ со среднемолекулярной массой (МСМ). У обследованных нами больных сальмонеллезом уровень МСМ на 96 % выше по сравнению с контролем (рис. 3.2.2). По нашим данным содержание МСМ при сальмонеллезе повысилось в 1,9 раза, что согласуется с данными исследований Б.С. Нагаева и М.И. Габриловича. В наших исследованиях уровень МСМ повышается в разгар заболевания [табл. 3.2.1]. Как указывают многие авторы повышение уровня МСМ является неблагоприятным признаком. Объясняется это тем, что отдельные фракции МСМ обладают различной биологической активностью: ингибируют эритропоэз, угнетают синтез гемоглобина, ДНК, глюконеогенез, изменяют проницаемость мембран, нарушают тканевое дыхание и микроциркуляцию. Поэтому, среди широкого круга метаболитов, оказывающих токсическое действие, интегральным показателем эндотоксикоза считают уровень МСМ [39, 40, 48, 56]. Важное звено в системе детоксикации организама представляет альбулин, поскольку он переносит к гепатоцитам эндогенные метаболиты. Эффективная концентрация альбулина при сальмонеллезе снижается, т.к. токсические вещества занимают центры связания в молекуле альбулина. Следовательно, связывающая способность альбулина может служить критерием общей интоксикации организма. Загруженность альбулина метаболитами дает информацию об эффективности функционирования печени и почек – основных детоксирующих органов человека [41, 42]. В результате наших исследований ЭКА в острый период заболевания составила 42,3±2,87 (г/л), в период ранней реконвалесценции 43±2,16 (г/л). Содержание ОКА в острую фазу заболевания составляет 54,5±3,52 (г/л), в период ранней реконвалесценции 50±3,8 (г/л) [прилож. 6,7]. Снижение ЭКА ведет к повышению коэффициента токсичности. Было установлено, что индекс токсичности у больных сальмонеллезом возрастает на 123 % по сравнению с контролем [рис. 3.2.3]. По нашим данным уровень Ит в острую фазу заболевания повысился в 2,3 раза [табл. 3.2.1]. На основании проведенных исследований можно сделать следующее заключение: у больных сальмонеллезом происходят интенсификация ПОЛ и угнетение иммунитета, снижение антиоксидантной защиты и детоксикационной способности организма. Определение индекса токсичности по сывороточному альбулину в сыворотке крови больных

сальмонеллезом Рис. 3.2.3. Таким образом, в наших исследованиях мы установили, что при сальмонеллезе уровень показателей ПОЛ, уровень холестерина, Ит, ЦИК, МСМ повышается, что согласуется с данными, имеющимися в литературе [рис. 3.2.4]. В исследуемой нами группе больных наиболее информативными показателями являются МДА, Ит, МСМ. Выводы Список литературы 1. Покровский В.И., Килессо А.В., Ющук Н.Д. Сальмонеллезы, результаты и перспективы их научных исследований // Советская медицина. – 1994. - №5. – С. 3-8. 2. Будагян Ф.Е. Пищевые токсикозы, токсиноинфекции, их профилактика. – М.: Медицина, 1989. – 207 с. 3. Покровский В.И. Острые кишечные инфекции // Советская медицина, 1989. - №5. – С. 6-13. 4. Тимаков В.Д., Петровская В.Г. Биологические и генетические характеристики рода salmonella. – М.: Медицина, 1990. – 293с. 5. Бунин К.В. Пищевые токсикоинфекции. – М.: Медицина, 1989. – 302 с. 6. Бойченко М.Н. Сальмонеллез: Распространение возбудителя в организме // Журнал микробиологии и эпидемиологии, 1991. - №5. – С. 9-13. 7. Мельников В.И., Гимранов М.Г. Ферменты патогенности и токсины бактерий. – М.: Медицина, 1995. – 252с. 8. Бунин К.В., Бродов Л.Е. О возможности возникновения инфекционно- токсического шока при сальмонеллезе // Терапевтический архив, 1995. - №8. – С. 27-32. 9. Пак С.Г., Гурьянов М.Х., Пальцев М.А. Сальмонеллез. – М.: Медицина, 1990. – 304с. 10. Кац Л.Н., Зигангирова Н.А. Жирнокислотный состав ЛПС бактерий рода salmonella // Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1990. - №7. – С. 35-38. 11. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: Биологическая сущность и происхождение // Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1996. - №3. – С. 43- 46. 12. Mannel D.N., More R.N. Endotoxinin – duced tumor cytotoxic factor //Jn. Microbiology. – 1990. – Р. 141. 13. Ющук Н.Д., Тендетник Ю.М. Патогенез сальмонеллезов// Советская медицина. - 1991. - №8. - С. 77-82. 14. Бунин К.В. Основы патогенетической иммунологии инфекционных болезней// Клиническая медицина. - 1990. - №3. - С.9-13. 15. Малов В.А., Пак С.Г. Медико-биологические аспекты проблемы интоксикации в инфекционной патологии // Терапевтический архив. - №1. - 1992. - С. 7-12. 16. Аркамов В.А., Межирова И.М., Ткачук З. А. Патофизиологические аспекты эндогенной интоксикации при кишечной инфекции // Анестезиология и реаниматология. - 1990. - №5. - С. 28-32. 17. Кузнецов Н.Н., Девайкин Е.В., Егоров В.М. Синдром эндогенной интоксикации при критических состояниях организма, новые диагностические и прогностические возможности //Анестезиология и реаниматология. - 1996. - №6. - С. 21-27. 18. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник Российской академии медицинских наук. - 1998. - №7. - С. 43-57. 19. Шано В.П., Гюльмамедов Ф.И., Нестеренко А.Н. Варианты лечения критических состояний с учетом патогенеза SIRS-синдрома системного воспалительного ответа //Анестезиология и реаниматология. - 1997. - №6. - С. 48-52. 20. Юркив В.А. Эндогенные простагландины и их роль в механизме развития диареи //Простагландины в эксперименте и клинике. – 1990. - №5. - С. 176-177. 21. Марков Х.М. Современное учение о простагландинах //Патофизиология. - 1990. - №5 - С. 13-15. 22. Шубич М.Г., Авдеева М.Г. Медиаторные аспекты воспалительного процесса //Архив патологии. - 1997. - №2 - С. 3-8. 23. Ерин А.И. Механизмы ПОЛ. Запуск и регуляция //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1994. - Т.118. -№10. - С. 343-348. 24. Мамонтова Н.С. Инициирование ПОЛ в сыворотке крови //Клиническая медицина. - 1992. - №6. – С. 37-40. 25. Бурлакова Е.Б., Храпова И.Г. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты // Успехи химии. – 1990. - №9. – С. 1540-1557. 26. Волкова Л.И., Бондаренко М.И. Перекисное окисление липидов и механизм антиоксидантного действия // Врачебное дело. – 1991. - №12. – С. 35- 38. 27. Бенина Н.Ф., Чеганова М.И. Активность окислительно- восстановительных ферментов у больных с хроническими воспалительными заболеваниями // Клиническая медицина. – 1989. - №1. – С.17-22. 28. Ахмедов Д.Р. Клинико-патогенетическое значение антиоксидантной системы при инфекционных заболеваниях // Иммунология. – 1994. - №2. – С. 25- 27. 29. Оконенко Л.Б. Перекисное окисление липидов при сальмонеллезе // Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1994. - №6. – С. 55-58. 30. Махмудов О.С., Исматуллаев О.Ш. Клиническая эффективность применения витамина Е в лечении сальмонеллеза // Клиническая диагностика. – 1990. - №6. – С.93-95. 31. Титов В.Н., Творогова М.Г., Никитин С.В. Холестерин сыворотки крови: методические аспекты и диагностическое значение // Клиническая диагностика. – 1992. - №3. – С.45-51. 32. Курашвили Л.В., Волков А.С. Прогностическая значимость определения холестерина во фракции липопротеидов высокой плотности // Клиническая диагностика. – 1993. - №3. – С.5-8. 33. Лященко Ю.И., Трихлеб В.И. Циркулирующие иммунные комплексы при инфекционных заболеваниях // Советская медицина. – 1991. - №1. – С. 27-29. 34. Вельбри А.Л. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов и иммуноглобулинов для характеристики патологического процесса // Лабораторное дело. – 1990. - №5. – С. 7-18. 35. Виноградова Т.В., Капелько М.А. Взаимосвязь между уровнем ЦИК и функциональным состоянием фагоцитирующей системы // Иммунология. – 1991. - №5. - С. 63-66. 36. Сура В.В., Масонов Е.Л., Борисов Н.А. Клинико-патогенетические закономерности развития болезней иммунных комплексов // Терапевтический архив. – 1987. - №12. – С. 3-10. 37. Владыка А.С., Левицкий Э.Р., Поддубная Л.П. Средние молекулы и проблема эндогенной интоксикации при критических состояниях различной этиологии // Анестезиология и реаниматология. – 1990. - №1. – С. 37-41. 38. Николайчик В.В., Кирковский В.В., Лобачева Г.А. «Средние молекулы» - образование и способы определения // Лабораторное дело. – 1989. - №8. – С. 31-33. 39. Киреев С.С., Багмут Т.А., Курочкин М.Ю. Определение тяжести эндотоскикоза при критических состояниях организма // Педиатрия. – 1990. - №6. – С.107-109. 40. Владыка А.С., Беляков И.А. Диагностическое значение уровня МСМ в крови при оценке тяжести эндотоксинемии // Вестник хирургии. – 1989. – №8. – С. 126-129. 41. Иванов А.И., Сарнацкая В.В., Короленко Е.А. Модификация лигандной нагрузки и структуры сывороточного альбулина человека при различных методах выделения // Биохимия. – 1996. – т. 61. – вып.№5. – С. 903-912. 42. Миллер Ю.И., Добрецов Г.Е. Молекулярные основы флюоресцентного метода определения связывающей емкости альбулина сыворотки крови // Биохимия. – 1994. - №5. – С.20-28. 43. Мартыненко Л.Д., Шепелев А.П. Перекисное окисление липидов при экспериментальной сальмонеллезной инфекции // Журнал Микробиологии и эпидемиологии. – 1990. - №4.– С.7-10. 44. Чудинова В.В., Алексеев С.М. Перекисное окисление липидов и механизм антиоксидантного действия // Биоорганическая химия. – 1994. - №10. – т. 20. – С. 1029-1047. 45. Творогова М.Г. Степень достоверности однократного определения холестерина (обзор литературы) // Клиническая диагностика. – 1997. - №1. – С. 4-5. 46. Ильинский И.А., Лукинская Т.В. Циркулирующие иммунные комплексы при сальмонеллезе // Иммунология. -–1994. - №4. – С. 105-108. 47. Фролов В.М., Ющук И.Д. Иммунный статус больных сальмонеллезом // Иммунология. – 1992. - №10. – С. 108-112. 48. Нагаев Б.С., Габрилович М.И., Кимова И.А. Содержание среднемолекулярных пептидов в плазме крови больных сальмонеллезом // Инфекционные болезни. – 1996. - №6. – С. 12-17. 49. Field M., Musch M.W. Role of prostaglandins in regulation of instestional elektrolyte transport // Prostaglandins. – 1991. – vol.21. – P. 73-80. 50. Jaya P.S., Agstine J., Menon V.P. Roll of lipid peroxides, glutathione and antiperoxidative erzymes in alcohd and drus toxicity // Exp. Biol. Jndian J. – 1993. - №5. – P. 453-459. 51. Praper H.H., Sgvires E.J., Agarwal S., Hadley M. A comporative evalution of thiobarbituric acid methods for the determination of malondialdehyde in biological materials // Free. Radic. Biol. Med. – 1993. - №4. – P. 353-363. 52. Anderson D., Phillips B.T. Schemere P. The effect of variovus antioxidants and other modifying agents on oxygen radical generated DNA famage in human lymphucytes in the comet assay // Environ. and Mol. Mutagenes. – 1994. – 23. Suppl n.23. – P. 2-8. 53. Desharer David, Wood Gwendolyn E., Friedman Richard L. Mollecular characterirution of catalase from Bortetella pertussis: Jdentification of the Kat A promot er in an upstream insertion seguence // Mol. Microbiol. – 1994. – №1. – P. 123-130. 54. Cheigton W.D., Zambent P.H., Mischer P.A. Circulationg immune complexes in infections diseases // Jmmunol. – 1993. – v.111. – P. 1219-1227. 55. Webster David M., Rees Anthohy R. Antibody – antigen interactions // Curr. Opinion struct. Biol. – 1994. - №1. – P. 123-129. 56. Schimuzu T., Kondo R. A method for the detection of Medium – sized molecules //Anch. Biochem. – 1991. – vol. 206. – P. 271-276. 57. Bannet E.V. Chia D., Restivo C. et al. – peptides of the “middle molecules” group // Analyt. Biochem. – 1994. – vol. 86. – P.271-278. ПРИЛОЖЕНИЕ Приложение 1. Биохимические показатели крови практически здоровых людей, n=51.
№ п/пФ. И. О.ВозрастПолДата анализаМДА (мкМоль/л)

ЦИК

(усл. ед.)

Уровень холестерина

ммоль/л

Активность каталазы

МСМ

(усл. ед.)

123456

7

8910
1К. В. И.35Ж5.02.98.3,59

30

3,4719,40,358
2К. Б. А.39М5.02.98.3,62

30

4,9517,20,225
3У. С. Б.29М15.02.98.2,18

45

3,5416,10,352
4И. И. И. 31Ж17.02.98.3,6

60

5,18816,80,214
5К. В. Л. 34М17.02.98.3,48

100

4,9017,10,287
6М. В. В.40М17.02.98.4,6

69

3,91515,80,254
7С. П. Б.40М25.02.98.3,59

40

4,05616,60,269
8Л. Е. В.32М25.02.98.3,47

30

5,04715,70,362
9Г. Т. Ю.28Ж15.03.98.4,65

76

5,14116,20,261
10А. И. А. 28Ж16.03.98.3,53

34

5,18816,90,253
11Л. Л. Я.40Ж16.03.98.4,00

99

3,7717,40,357
12С. Б. И.46Ж19.03.98.3,45

70

3,3318,20,167
13С. И. В.28Ж16.04.98.3,48

35

3,4916,30,253
14М. А. И.31М16.04.98.3,54

61

3,4014,50,256
15Х. А. И.37М22.04.98.4,47

30

4,2416,10,268
16К. И. П.30М22.04.98.3,59

34

3,9116,40,377
17Р. И. И.33М22.04.98.4,35

110

5,1417,30,245
18И. И. А.29Ж27.04.98.3,48

31

5,3317,80,280
19И. В. А.40М27.04.98.3,60

60

4,2418,10,218
20М. И. В.36Ж10.05.98.3,54

54

5,0917,60,382
21С. В. Г.32М10.05.98.4,0

33

4,8616,70,355
22З. О. А.32М12.05.98.3,77

45

3,7716,30,232
23Я. В. В.30М12.05.983,61

120

3,3315,80,274
24П. И. В.31М17.05.98.3,44

100

3,9614,90,286
25А. С. Б.36М17.05.98.2,93

69

5,1416,80,253
26С. А. И.20Ж3.02.99.3,61

70

5,1916,60,268
27М. И. В.34М9.02.99.3,53

43

5,0517,30,351
28Д. О. В.37Ж9.02.99.3,61

27

4,917,80,194
29Т. С. Д.22М16.02.99.3,75

30

4,9514,50,309
30К. В. А.28М9.04.99.3,48

60

3,7716,20,214
31Ш. А. Л.30М17.02.993,59

58

4,4817,20,232
32Г. А. К.41Ж17.02.994,21

41

3,9116,80,305
33Ч. И. В.24М16.02.993,99

30

5,0516,30,265
123456

7

8910
34С. О. Ю.30М16.02.99.3,57

35

3,5816,90,239
35С. С. М.27М16.02.99.3,02

46

3,3915,70,248
36М. С. В.29Ж9.02.99.2,50

38

5,1414,30,372
37Р. Т. А.28Ж9.02.99.3,88

33

3,7716,20,245
38С. С. В. 28Ж16.04.98.2,61

54

4,2416,80,261
39С. В. В.32М16.04.98.3,14

37

5,3817,10,379
40Р. Т. В.23М15.05.98.3,99

19

4,9518,30,358
41О. А. Е.25М15.05.98.3,24

75

5,0516,90,251
42А. В. Е.33М18.05.98.3,88

28

4,5617,50,275
43Б. В. С.44М18.05.98.4,26

110

3,3315,60,213
44С. В. И.30Ж19.02.99.4,09

46

4,8114,80,307
45К. Ю. И.46М19.02.99.3,77

48

5,0316,30,264
46В. Ю. И.37М27.03.98.3,81

43

4,9516,70,280
47К. Е. И.32М27.03.98.3,54

44

5,3316,90,232
48Ж. Ю. С.30М5.04.98.4,04

85

3,7717,30,218
49П. В. А.31Ж5.04.98.3,15

23

4,2418,80,381
50Б. А. И.31М13.04.983,45

37

5,0516,80,239
51Л. Т. Ю.42М9.02.99.3,04

59

5,33
Μ3,61

52,62

4,4516,70,280
m0,07

3,52

0,680,150,01
σ0,48

25,17

0,091,040,06
Приложение 2 Содержание биохимических показателей в сыворотке крови практически здоровых людей по данным литературы

Группа

обследованных

n

МДА

мкМоль/л

Активность

каталазы

мкат/л

ЦИК

усл. ед.

МСМ

усл. ед.

Холестерин

ммоль/л

Мартыненко Л.Д., 1990314,36±0,27
Оконенко Л.Б., 19943416,3±0,3
Куликов И.Н., 19964054,2±3,2
Нагаев Б.С., 1996700,31±0,02
Творогова М.Г. 1995404,62±0,31
Приложение 3 Биохимические показатели крови практически здоровых людей, n=51
№ п/пФ. И. О.ВозрастПолДата анализаЭКА (г/л)

ОКА

(г/л)

ОКА

(%)

Ит

(усл. ед.)

123456

7

89
1К. В. И.35Ж5.02.98.43

49

880,13
2К. Б. А.39М5.02.98.46

53

870,15
3У. С. Б.29М15.02.98.34

41

840,16
4И. И. И. 31Ж17.02.98.38

44

860,15
5К. В. Л. 34М17.02.98.48

56

860,16
6М. В. В.40М17.02.98.47

52

900,10
7С. П. Б.40М25.02.98.46

53

870,15
8Л. Е. В.32М25.02.98.48

57

840,18
9Г. Т. Ю.28Ж15.03.98.44

49

900,11
10А. И. А. 28Ж16.03.98.42

49

860,17
11Л. Л. Я.40Ж16.03.98.46

51

900,11
12С. Б. И.46Ж19.03.98.36

50

890,11
13С. И. В.28Ж16.04.98.47

54

870,14
14М. А. И.31М16.04.98.47

52

900,10
15Х. А. И.37М22.04.98.45

50

900,11
16К. И. П.30М22.04.98.35

41

850,17
17Р. И. И.33М22.04.98.42

46

910,09
18И. И. А.29Ж27.04.98.38

44

860,15
19И. В. А.40М27.04.98.47

52

900,10
20М. И. В.36Ж10.05.98.47

54

870,14
21С. В. Г.32М10.05.98.34

41

840,16
22З. О. А.32М12.05.98.46

53

870,15
23Я. В. В.30М12.05.9839

44

880,12
24П. И. В.31М17.05.98.51

55

930,07
25А. С. Б.36М17.05.98.43

48

890,11
26С. А. И.20Ж3.02.99.47

54

870,14
27М. И. В.34М9.02.99.38

44

860,15
28Д. О. В.37Ж9.02.99.49

55

890,12
29Т. С. Д.22М16.02.99.36

40

890,11
30К. В. А.28М9.04.99.38

44

860,15
31Ш. А. Л.30М17.02.9940

43

930,08
32Г. А. К.41Ж17.02.9942

46

910,09
33Ч. И. В.24М16.02.9948

56

860,16
123456

7

89
34С. О. Ю.30М16.02.99.49

55

890,12
35С. С. М.27М16.02.99.47

52

900,10
36М. С. В.29Ж9.02.99.45

50

900,11
37Р. Т. А.28Ж9.02.99.39

44

880,13
38С. С. В. 28Ж16.04.98.43

48

890,11
39С. В. В.32М16.04.98.36

40

900,11
40Р. Т. В.23М15.05.98.38

44

860,15
41О. А. Е.25М15.05.98.35

41

850,17
42А. В. Е.33М18.05.98.48

53

910,10
43Б. В. С.44М18.05.98.37

44

840,18
44С. В. И.30Ж19.02.99.45

50

900,11
45К. Ю. И.46М19.02.99.47

54

870,14
46В. Ю. И.37М27.03.98.44

51

860,16
47К. Е. И.32М27.03.98.42

46

910,09
48Ж. Ю. С.30М5.04.98.48

56

860,16
49П. В. А.31Ж5.04.98.47

53

890,13
50Б. А. И.31М13.04.9836

40

890,11
51Л. Т. Ю.42М9.02.99.43

48

890,11
Μ43

48,8

880,13
m0,01
σ0,03
Приложение 4 Биохимические показатели крови больных сальмонеллезом в острый период, n=30.
№ п/пФ. И. О.ВозрастПолДата анализа№ истории болезниМДА (мкМоль/л)

ЦИК

(усл. ед.)

Уровень

холестерина

ммоль/л

Активность каталазы

МСМ

(усл. ед.)

1234567

8

91011
1М. А. М.32М14.02.98.

160А02.8

5,84

74

5,3713,60,611
2Л. В. И.37М14.02.98.

230А02.08

6,02

133

8,9112,70,537
3С. О. Е.29М9.02.99.

410А02.1

7,18

96

5,7413,80,683
4Б. В. И.46Ж9.02.99.

182А02.1

5,93

111

5,6813,10,700
5Х. В. В.28Ж11.07.99.

523А02.0

8,13

120

4,7514,40,570
6С. Н. Е.19Ж12.10.98.

728А02.8

9,34

82

7,0311,80,700
7М. О. И.24Ж11.10.98.

615А02.8

6,59

140

9,8510,90,782
8К. Г. А.32М3.03.98.

363А02.8

7,77

68

7,313,50,604
9Д. И. Е.39М3.03.98.

290А02.8

5,96

97

5,7213,00,543
10Е. Т. А.17Ж10.02.98.

490А02.1

8,93

88

4,1212,70,529
11Р. О. А.37Ж10.02.98.

517А02.1

7,13

105

8,9113,50,690
12К. С. И.39М27.02.98.

560А02.8

6,60

92

5,713,10,581
13Ш. Г. В.25Ж13.03.98.

393А02.8

7,25

148

4,8213,60,742
14Б. И. Р.41М13.03.98.

102А02.8

8,18

105

6,8412,80,458
15П. О. К.33Ж4.07.98.

280А02.8

9,05

76

4,7212,40,617
16К. И. И.29Ж4.07.98.

432А02.1

5,94

115

9,6713,70,610
17Т. С. И. 31Ж4.07.98.

630А02.0

6,64

73

5,913,20,623
18С. И. В.47М28.09.98.

216А02.0

7,81

108

5,0613,60,542
19К. И. Б.42Ж28.09.98.

390А02.8

8,20

139

4,8411,70,413
20П. О. А.53М15.02.99.

575А02.8

6,95

132

6,4510,90,562
21С. И. П.25М15.02.99.

721А02.8

7,17

99

5,612,80,717
22Е. Т. С.24Ж17.02.99.

470А02.8

5,27

114

8,4813,60,657
23З. О. Ю.36М17.02.99.

370А02.0

7,53

83

5,5214,20,614
24М. Л. А.41М6.10.98.

182А02.0

8,41

92

7,7313,30,534
25Д. С. К.22Ж6.10.98.

652А02.8

6,12

100

7,7313,80,586
26К. С. Д.18Ж11.10.98.

713А02.8

7,03

86

10,1512,90,570
27Е. А. В.43М28.08.98.

760А02.8

5,90

77

6,813,70,681
28М. О. Р.33М28.08.98.

535А02.8

7,77

69

6,2413,60,649
29П. З. Л.30Ж7.12.98.

862А02.0

6,78

102

5,7213,70,740
30Е. В. В.31Ж7.12.98.

718А02.8

8,27

95

3,8912,90,531
Μ7,19

100,63

6,5413,090,550
m0,196

4,04

0,070,160,02
σ1,07

22,138

0,010,850,11
Приложение 5 Биохимические показатели крови больных сальмонеллезом в стадии ремиссии, n=30.
№ п/пФ. И. О.ВозрастПолДата анализа№ истории болезниМДА (мкМоль/л)

ЦИК

(усл. ед.)

Уровень

холестерина

ммоль/л

Активность каталазы

МСМ

(усл. ед.)

1234567

8

91011
1М. А. М.32М14.02.98.160А02.83,84

54

3,7715,80,225
2Л. В. И.37М14.02.98.230А02.84,02

48

4,9515,60,287
3С. О. Е.29М9.02.99410А02.15,18

35

5,1414,50,354
4Б. В. И.46Ж9.02.99.182А02.13,03

96

4,2416,10,268
5Х. В. В.28Ж11.07.98.523А02.04,15

77

5,1916,40,256
6С. И. Е.19Ж12.10.98.728А02.85,96

68

3,9615,70,358
7М. О. И.24Ж11.10.98.615А02.83,19

58

3,3914,90,280
8К. Г. А.32М3.03.98.363А02.84,17

60

5,0514,50,332
9Д. И. Е.39М3.03.98.290А02.82,98

56

5,1416,20,253
10Е. Т. А.17Ж3.03.98.490А02.15,63

73

4,9517,30,209
11Р. О. А.37Ж10.02.98517А02.13,65

100

5,2415,80,209
12К. С. И.39М10.02.98.560А02.83,53

83

5,0914,30,214
13Ш. Г. В.25Ж27.02.98.393А02.84,12

69

3,7717,60,272
14Б. И. Р.41М13.03.98.102А02.83,68

75

4,2417,10,353
15П. О. К.33Ж13.03.98.280А02.84,16

81

3,7715,30,386
16К. И. И.29Ж4.07.98.432А02.12,93

63

5,0517,70,232
17Г. С. И.31Ж4.07.98.630А02.03,57

77

3,7516,80,305
18С. И. В.47М4.07.98.216А02.83,69

68

4,2416,40,265
19К. И. Б.42Ж28.09.98.390А02.84,12

100

3,9215,90,413
20П. О. А.53М28.90.98.575А02.83,95

64

4,1616,80,294
21С. И. П.25М15.02.99.721А02.83,17

73

5,3314,30,562
22Е. Т. С.24Ж15.02.99.470А02.82,50

72

4,8114,90,531
23З. О. Ю.36М17.02.99370А02.04,53

59

4,2415,60,309
24М. Л. А.41М17.02.99.182А02.04,41

43

5,0216,30,265
25Д. С. К.22Ж6.10.98.652А02.83,12

48

3,3316,90,272
26К. С. Д.18Ж6.10.98.713А02.83,03

66

5,9115,70,239
27Е. А. В.43М11.10.98.760А02.82,90

72

3,8915,90,245
28М. О. Р.33М28.08.98.535А02.84,77

73

4,7416,20,179
29П. З. Л.30Ж7.12.98.862А02.03,78

80

5,5814,70,524
30Е. В. В.31Ж7.12.98.718А02.84,27

77

3,6813,90,355
Μ3,87

68,9

4,6515,840,31
m0,15

2,8

0,70,190,02
σ0,81

15,41

0,091,020,1
Приложение 6 Биохимические показатели крови больных сальмонеллезом в острый период, n=30
№ п/пФ. И. О.ВозрастПолДата анализаЭКА (г/л)

ОКА

(г/л)

ОКА

(%)

Ит

(усл. ед.)

123456

7

89
1К. В. И.35Ж5.02.98.42

54

780,28
2К. Б. А.39М5.02.98.42

56

750,33
3У. С. Б.29М15.02.98.44

59

740,35
4И. И. И. 31Ж17.02.98.38

49

770,29
5К. В. Л. 34М17.02.98.47

59

790,25
6М. В. В.40М17.02.98.42

57

740,37
7С. П. Б.40М25.02.98.42

55

760,31
8Л. Е. В.32М25.02.98.43

54

800,26
9Г. Т. Ю.28Ж15.03.98.44

59

750,35
10А. И. А. 28Ж16.03.98.45

55

820,22
11Л. Л. Я.40Ж16.03.98.44

59

750,34
12С. Б. И.46Ж19.03.98.40

51

780,27
13С. И. В.28Ж16.04.98.42

58

720,38
14М. А. И.31М16.04.98.42

56

750,34
15Х. А. И.37М22.04.98.45

54

830,21
16К. И. П.30М22.04.98.38

55

690,43
17Р. И. И.33М22.04.98.38

49

780,29
18И. И. А.29Ж27.04.98.44

55

800,25
19И. В. А.40М27.04.98.42

57

740,36
20М. И. В.36Ж10.05.98.43

57

750,32
21С. В. Г.32М10.05.98.35

41

850,17
22З. О. А.32М12.05.98.47

58

810,24
23Я. В. В.30М12.05.9840

51

780,27
24П. И. В.31М17.05.98.43

50

860,16
25А. С. Б.36М17.05.98.42

56

750,33
26С. А. И.20Ж3.02.99.43

54

800,26
27М. И. В.34М9.02.99.42

58

720,38
28Д. О. В.37Ж9.02.99.48

57

840,19
29Т. С. Д.22М16.02.99.45

54

830,21
30К. В. А.28М9.04.99.38

49

780,29
Μ42,3

54,5

77,70,29
m2,87

3,52

0,01
σ17,6

24,12

0,07
Приложение 7 Биохимические показатели крови больных сальмонеллезом в стадии ремиссии, n=30
№ п/пФ. И. О.ВозрастПолДата анализаЭКА (г/л)

ОКА

(г/л)

ОКА

(%)

Ит

(усл. ед.)

123456

7

89
1К. В. И.35Ж5.02.98.46

53

860,15
2К. Б. А.39М5.02.98.34

41

840,16
3У. С. Б.29М15.02.98.38

44

860,15
4И. И. И. 31Ж17.02.98.47

51

840,18
5К. В. Л. 34М17.02.98.42

51

860,16
6М. В. В.40М17.02.98.36

40

890,11
7С. П. Б.40М25.02.98.47

51

840,18
8Л. Е. В.32М25.02.98.35

41

850,17
9Г. Т. Ю.28Ж15.03.98.36

40

850,11
10А. И. А. 28Ж16.03.98.46

53

860,15
11Л. Л. Я.40Ж16.03.98.39

44

880,12
12С. Б. И.46Ж19.03.98.54

63

860,16
13С. И. В.28Ж16.04.98.36

50

890,11
14М. А. И.31М16.04.98.36

42

860,17
15Х. А. И.37М22.04.98.44

52

850,18
16К. И. П.30М22.04.98.48

56

860,16
17Р. И. И.33М22.04.98.43

48

900,12
18И. И. А.29Ж27.04.98.42

47

890,12
19И. В. А.40М27.04.98.49

56

880,14
20М. И. В.36Ж10.05.98.35

41

850,17
21С. В. Г.32М10.05.98.47

52

900,10
22З. О. А.32М12.05.98.43

49

880,13
23Я. В. В.30М12.05.9844

49

900,11
24П. И. В.31М17.05.98.46

51

900,11
25А. С. Б.36М17.05.98.51

55

920,07
26С. А. И.20Ж3.02.99.44

51

860,15
27М. И. В.34М9.02.99.48

54

890,13
28Д. О. В.37Ж9.02.99.42

49

860,17
29Т. С. Д.22М16.02.99.48

57

840,18
30К. В. А.28М9.04.99.45

54

830,20
Μ43

50

84,30,15
m2,16

3,8

0,01
σ14,9

15,41

0,03